Protokollok (Február 2020)

A megemelt plusz labirintus használata szorongással kapcsolatos viselkedés vizsgálatára rágcsálókban

A megemelt plusz labirintus használata szorongással kapcsolatos viselkedés vizsgálatára rágcsálókban

Absztrakt Az emelkedett plusz labirintus rágcsálók körében széles körben alkalmazott viselkedési módszer, és validálták a farmakológiai szerek és a szteroid hormonok szorongásgátló hatásának felmérésére, valamint az agy régiók és a szorongással kapcsolatos viselkedés alapjául szolgáló mechanizmusok meghatározására. Röviden: patkányokat vagy egere

A központi idegrendszeri progenitorok és neuronok meghatározott és egységes populációjának generálása egér embrionális őssejtekből

A központi idegrendszeri progenitorok és neuronok meghatározott és egységes populációjának generálása egér embrionális őssejtekből

Absztrakt Részletes protokollt írnak le, amely lehetővé teszi a glutamaterg neuronok lényegében tiszta populációinak generálását egér embrionális őssejtekből (ES). Az ES-sejtek tenyészetén alapul, amelyeket megkülönböztetés nélkül tartanak megismétléses megosztással, majd nem tapadó sejt-aggregátumokként amplifikálják. A retinsavval végzett kezelés

Helyesbítés: Standardizált protokoll az egerek ismételt társadalmi káros stresszére

Helyesbítés: Standardizált protokoll az egerek ismételt társadalmi káros stresszére

Az eredeti cikket 2011. július 21-én tették közzé Nat. Protoc. 6 , 1183–1191 (2011); doi: 10.1038 / nprot.2011.361; online közzétett 2011. július 21-én; javítva a nyomtatás után, 2014. december 17 A cikk eredetileg közzétett változatában némi zavart okozott a következő mondat értelmezése: „Ezenkívül a vereségeket állandó állatorvosi értékelés alatt, az összes szükséges intézményi felülvizsgálati testület és szabvány teljes jóváhagyásával kell végrehajtani.” A további érthetőség érdekében a mondat a köve

Citokinezis-blokk mikronukleusz citomitest

Citokinezis-blokk mikronukleusz citomitest

Ezt a cikket frissítettük Absztrakt A citokinezis-blokk mikronukleusz citomitest egy átfogó rendszer a DNS károsodás, a citosztatis és a citotoxicitás mérésére. A DNS-károsodás eseményeit pontosan az osztott binukleáris (BN) sejtekben értékelik, és tartalmazzák (a) mikronukleuszokat (MNi), a kromoszóma-törés és / vagy a teljes kromoszómavesztés biomarkereit, (b) nukleoplazmatikus hidakat (NPB-k), a DNS biomarkereit. hamis javítás és / vagy

A fluoro-tirozinek helyspecifikus beépítése az E. coli ribonukleotid-reduktáz R2 alegységébe expresszált protein ligálással

A fluoro-tirozinek helyspecifikus beépítése az E. coli ribonukleotid-reduktáz R2 alegységébe expresszált protein ligálással

Absztrakt Az expresszált fehérje ligáció (EPL) lehetővé teszi a célfehérje félszintézisét próbák vagy természetellenes aminosavak helyspecifikus beépítésével az N vagy C végén. Az alábbiakban leírjuk azt a protokollt, amelyet laboratóriumunkban fejlesztettek ki annak érdekében, hogy az EPL alkalmazásával az Escherichia coli ribonukleotid-reduktáz kis alegységének 356. maradékához fluoro-tirozinok

Helyesbítés: Az egyes sejtek genomszintű másolatainak elemzése

Helyesbítés: Az egyes sejtek genomszintű másolatainak elemzése

Az eredeti cikket 2012. május 3-án tették közzé Nat. Protoc. 7 , 1024–1041 (2012); online közzétett 2012. május 3-án; javítva a nyomtatás után, 2016. február 24 A cikk eredetileg közzétett változatában a reagensbeállítás szakaszban leírt NST-pufferben a NaCl koncentrációjának mértékegysége helytelen volt. A helyes egység legyen mM.

Nagy áteresztőképességű in vivo mikronukleusz-teszt genom instabilitás szűrésére egerekben

Nagy áteresztőképességű in vivo mikronukleusz-teszt genom instabilitás szűrésére egerekben

témák DNS károsodás és javítás Áramlásos citometria Genomiális instabilitás Egér Absztrakt Leírunk egy érzékeny, robusztus, nagy áteresztőképességű módszert a mikronukleuszok kialakulásának, a genom instabilitási markereinek számszerűsítésére az egér vörösvértesteiben. A mikronukleuszok teljes kromos

Szubsztrát aktivitás szűrés (SAS): általános eljárás fragmenseken alapuló nem peptid proteáz szubsztrát könyvtár előállítására és szűrésére az inhibitorok felfedezésére

Szubsztrát aktivitás szűrés (SAS): általános eljárás fragmenseken alapuló nem peptid proteáz szubsztrát könyvtár előállítására és szűrésére az inhibitorok felfedezésére

Absztrakt A szubsztrát aktivitás szűrése (SAS) egy fragmenseken alapuló módszer új szubsztrátumok gyors kifejlesztésére és azok Cys és Ser proteázok nem peptid inhibitorákká történő átalakítására. Az eljárás három lépésből áll: (i) változatos, kis molekulatömegű N -acilcsoportokkal rendelkező N- acil-amino-kumarin-könyvtárat szűrünk át a proteáz-szubsztrátok azonosítására egyszerű fluoreszcencia-alapú vizsgálat alkalmazásával; (ii) az azonosított N- acil-amino-kumarin-szubsztrátokat gyors analóg szintézissel és kiértékeléssel optimalizálják; és (iii) az optimalizált szubsztrátok inhibitorokká a

A szarvasmarha-kromaffin-sejtek primer tenyészete

A szarvasmarha-kromaffin-sejtek primer tenyészete

Absztrakt Ez a protokoll az egyes kromaffin sejtek primer tenyésztését írja le a szarvasmarha mellékvese mellékvese mellékvese enzimatikus emésztése útján. Az 1970-es évek vége óta ezek a sejtek hasznos modellrendszert szolgáltattak a neurotranszmitterek bioszintézisének, tárolásának és felszabadulásának tanulmányozására a katecholaminerg rendszerben. A protokollt három szaka

Bioszenzoros vizsgálatok PQS, HHQ és rokon 2-alkil-4-kinolon kvórumérzékelő szignálmolekulákra

Bioszenzoros vizsgálatok PQS, HHQ és rokon 2-alkil-4-kinolon kvórumérzékelő szignálmolekulákra

Absztrakt A 2-alkil-4-kinolonok (AHQ-k), például a 2-heptil-3-hidroxi-4-kinolon (PQS) és a 2-heptil-4-kinolon (HHQ) kvórumérzékelő szignálmolekulák. Az alábbiakban ismertetjük az AHQ kimutatásának, a kísérleti azonosításnak és a mennyiségi meghatározásnak azokat a módszereit, amelyek lux- alapú Pseudomonas aeruginosa AHQ bioszenzor törzset alkalmaznak. A protokoll leírja min

A kromoszóma-konformáció elfogási vizsgálatok mennyiségi elemzése (3C-qPCR)

A kromoszóma-konformáció elfogási vizsgálatok mennyiségi elemzése (3C-qPCR)

Absztrakt A kromoszóma-konformáció elfogásának (3C) technológiája úttörő módszertan, amely lehetővé teszi az in vivo genomi szervezetek felderítését néhány tíztől néhány száz kilobázispáig terjedő skálán. A genom ilyen mértékű hajtogatásának megértése különösen fontos az emlősöknél, ahol diszpergált szabályozó elemek, például erősítők vagy szigetelők részt vesznek a génszabályozásban. A 3C technológia magában foglalja a sejtek formaldeh

Xenopus petesejtek és lebontott spermium-kromatin sejtmentes kivonatainak előállítása in vitro formált magok összeállításához és izolálásához Western blot és pásztázó elektronmikroszkópia (SEM) céljából

Xenopus petesejtek és lebontott spermium-kromatin sejtmentes kivonatainak előállítása in vitro formált magok összeállításához és izolálásához Western blot és pásztázó elektronmikroszkópia (SEM) céljából

Absztrakt Ez a protokoll ismerteti a sejtmentes kivonatok és a DNS-sablonok előállításának eljárásait a karmos varangy Xenopus laevis petesejtjéből, illetve a spermakromatinból . Ezt a rendszert a leírásban leírt pásztázó elektronmikroszkópiával (SEM) használtuk az eukarióta nukleáris burok (NE) és a nukleáris pórus komplexek (NPC) biokémiai igényeinek és szerkezeti útjainak elemzésére. Ez a protokoll megköveteli a

Genomok megszerzése nem tenyésztett környezeti mikroorganizmusokból FACS-alapú egysejtű genomika segítségével

Genomok megszerzése nem tenyésztett környezeti mikroorganizmusokból FACS-alapú egysejtű genomika segítségével

témák Környezeti mikrobiológia Áramlásos citometria Genomics Teljes genom amplifikáció Absztrakt Az egysejtű genomika hatékony eszköz a környezeti mikroorganizmusok genetikai felépítésének feltárására, amelyek túlnyomó többségét nehéz, ha nem lehetetlen, a jelenlegi megközelítésekkel termeszteni. Itt egy átfogó protokollt

Kollagén által kiváltott artritisz

Kollagén által kiváltott artritisz

Absztrakt A kollagén-indukált artritisz (CIA) egérmodell a rheumatoid arthritis leggyakrabban vizsgált autoimmun modellje. Az autoimmun ízületi gyulladást ebben a modellben teljes Freund adjuváns és II típusú kollagén (CII) emulziójával indukálják. Ez a protokoll leírja a CII megszerzéséhez, kezeléséhez és előállításához szükséges lépéseket, valamint az egér törzsek kiválasztását, a megfelelő immunizálási technikát, valamint az artritisz előfordulásának és súlyosságának értékelését. Általában az artritisz első tünetei ebben a model

Agyi organoidok generálása humán pluripotens őssejtekből

Agyi organoidok generálása humán pluripotens őssejtekből

témák Az idegrendszer fejlődése neurogenesis Neurológiai modellek Őssejtek differenciálódása Absztrakt Az emberi agy fejlődése számos olyan egyedi szempontot mutat, mint például a megnövekedett bonyolultság és az idegsejtkitermelés, amelyek bebizonyosodtak, hogy a modell organizmusokban nehéz tanulmányozni. Ennek eredményekén

Erratum: A szupertekercselt kör alakú DNS préselt részecskeanalízise peptid-nukleinsav kezek segítségével

Erratum: A szupertekercselt kör alakú DNS préselt részecskeanalízise peptid-nukleinsav kezek segítségével

Az eredeti cikket 2014. augusztus 21-én tették közzé Nat. Protoc. 9 , 2206–2223 (2014); doi: 10.1038 / nprot.2014.152; online közzétett 2014. augusztus 21-én; javítva a nyomtatás után, 2014. szeptember 12 A cikk eredetileg közzétett változatában a 2., a 4., a 8. és a 9. ábrát átalakító forrást nem idézték és jóváírták helyesen. A hibát a cikk HTML és PDF v

Az egér retina mononukleáris fagocitáinak átfogó elemzése

Az egér retina mononukleáris fagocitáinak átfogó elemzése

témák roimmunology Retina Absztrakt A veleszületett immunrendszert számos degeneratív és gyulladásos retina rendellenesség esetén aktiválják, mint például az életkorral összefüggő makuladegeneráció (AMD). A retina mikroglia, a koroid makrofágok és a toborzott monociták, amelyeket együttesen „retina mononukleáris fagocitáknak” nevezünk, a szembetegség kimenetelének kritikus meghatározói. Számos publikáció ismertette eze

Immobilizált fém affinitás kifejlesztése, validálása és megvalósítása foszfokémiai (IMAP) alapú nagy teljesítményű szűrővizsgálatokkal alacsony molekulatömegű vegyület könyvtárak számára

Immobilizált fém affinitás kifejlesztése, validálása és megvalósítása foszfokémiai (IMAP) alapú nagy teljesítményű szűrővizsgálatokkal alacsony molekulatömegű vegyület könyvtárak számára

Absztrakt Ez a protokoll leírja az automatizált immobilizált fém affinitás foszfokémiai (IMAP) alapú fluoreszcencia polarizációval (FP) és az idő-felbontású fluoreszcencia rezonancia-transzfer energiával (TR-FRET) történő nagyteljesítményű szűrővizsgálat (HTS) vizsgálatok fejlesztését, validálását és megvalósítását. kis molekulatömegű kináz inhibit

Helyesbítés: Kobalt alapú nanokatalizátorok zöld oxidációs és hidrogénezési folyamatokhoz

Helyesbítés: Kobalt alapú nanokatalizátorok zöld oxidációs és hidrogénezési folyamatokhoz

Az eredeti cikket 2015. május 21-én tették közzé Nat. Protoc. 10 , 916–926 (2015); online közzétett 2015. május 21-én; javítva nyomtatás után, 2015. szeptember 16 A cikk eredetileg közzétett változatában az 1. keretes cím helytelen volt; a helyes cím: „Katalizátor újrahasznosítási kísérletek nitrobenzollal: 30 óra.” A hibát kijavították (mind